Hoefer SE640 - Manual (Page 28)

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La separación de la muestra
Parámetros de electroforesis para geles de
poliacrilamida discontinuos
Los geles se pueden ejecutar en contextos de
tensión constante de corrientes o constantes.
Un ajuste de corriente constante se utiliza tradi-
cionalmente con un sistema de tampón discon-
tinuo de modo que la velocidad de migración
electroforética permanece inalterada a lo largo
de la carrera. Bajo estas condiciones, la tensión
aumenta a medida que avanza plazo. Un valor
más bajo en curso se recomienda para una
mayor resolución. El nivel óptimo de corriente se
debe determinar empíricamente; los principales
factores que deben equilibrarse incluyen la con-
centración del gel y la velocidad de migración, y
el calentamiento Joule y la distorsión resultante
banda. La Tabla 2 lista de salidas directrices
puntuales y ajustes para el espesor de gel, el
número de geles, y tasa de migración.
Corriente
Actos corrientes sobre el total de área de sección
transversal de todos los geles porque los geles están
conectados en paralelo en el circuito eléctrico. Así, la
configuración actual de un gel debe ser multiplicado
por el número de geles del espesor mismo gel que se
ejecutan de forma simultánea. Para un gel de 1,5 mm
de espesor, se aconseja un ajuste de la corriente
de arranque de 25 mA. (Dos de 1,5 mm de geles =
50 mA.)
Voltaje
El voltaje de partida para un gel de 1,5 mm de losa
conectado a una fuente de alimentación ajustado a
25 mA es generalmente de 80 a 90 V (utilizando
la SE 600 con un sistema tampón de Laemmli
discontinua para geles de SDS). El voltaje final
típicamente puede variar desde 220 hasta 400 V,
dependiendo de la longitud del gel. (Ver Tabla 2.)
Nota: Todos los modelos de la
serie SE600 utilizan placas de
18 cm de ancho. El espesor
de gel determina la sección
transversal (y el requisito de
corriente). La longitud de la
placa determina el tiempo de
ejecución.
Tabla 2: Sistema de tampón
de Laemmli partida
directrices punto
Gel de espesor* 1,5 mm
Actual por gel † 25 mA
corriente
constante
A partir de tensión ‡ 80 – 90 V
Tensión final 220 – 250 V
* Geles más gruesas o más delgada requieren
proporcionalmente más o menos corriente. Por
ejemplo, un gel de 0,75 mm, que es la mitad del
grosor de un gel de 1,5 mm, requiere la mitad
como mucho de corriente, o mA 12,5.
† La corriente debe ser multiplicado por el número
de geles. Por ejemplo, si dos sándwiches
están instalados, los cuatro geles requieren
cuatro veces más actual. La corriente se puede
aumentar más rápidas carreras si se utiliza
enfriamiento activo y puede ser disminuido por
más lentas carreras durante la noche.
‡ A los 25 mA por gel.